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如何挑选内参抗体

更新时间:2023-08-25      点击次数:158

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什么是内参?

Western Blot常用来比较不同条件下或不同细胞组织中目标蛋白表达量的相对多少,因此必须先确定上样量相同,才有比较的基础。在Western Blot实验中,可能因总蛋白浓度测定不准确,或是蛋白质上样时因操作产生误差,所以必须设置内部参照组来进行校正。此内部参照必须在不同细胞或组织间表达相对恒定,且有高水平的表达量,来确保不同样品间蛋白定量相同。而这样的参照蛋白,就称为内参,对应的抗体就称为内参抗体。

 

内参在WB实验中的重要性

1 用于校正蛋白水平,确保不同样品间蛋白定量(上样量)相同。可从条带粗细初步判定上样量是否有差异。进一步使用影像分析程序将目标蛋白量除以内参含量,所得到的数值即为校正后的目标蛋白相对含量,如此就可以进行目标蛋白相对量的比较。

2 确认转膜、显色等步骤是否均匀转移、呈色。内参一般选用高表达的蛋白,因此也可通过内参的条带,观察WB实验中的转膜、显色等步骤是否有异常。

3对文章发表绝对重要,增加实验的可信度。文章内放上内参的数据,较有说服力,文献审核者也会较相信实验数据。

 

如何挑内参抗体

通常会挑选各细胞或组织间稳定表达、并且不受实验影响的蛋白作为内参,但不同的实验还是有一些细节要注意,挑选内参可参考下面四点:

 

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