T7 RNA聚合酶 (1 KU/μL)说明书

更新时间：2023-10-24 点击次数：196

T7 RNA聚合酶 (1 KU/μL)说明书

产品详情

T7 RNA Polymerase，即T7 RNA聚合酶，是T7噬菌体DNA编码的酶，对T7启动子序列具有高度特异性。本酶是依赖于DNA的RNA聚合酶，具有 5′→3′的RNA聚合酶活性，可以催化单链或双链DNA T7启动子下游NTP的掺入，合成与T7启动子下游的模板DNA互补的RNA。

特点

该酶对T7启动子具有高度特异性，不识别其它生物来源的启动子。可以识别修饰的核苷酸，例如生物素标记、荧光素标记、放射性同位素、地高xin标记dNTP，用于各种标记RNA的合成，进行下游实验。

来源：携带T7 RNA聚合酶基因的E. coli

分子量：99 kDa

纯度：≥90%

比活：1 KU/μL

比活单位定义：在37℃、1小时内使1 nmol的CMP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位

存储缓冲液：50 mM Tris-HCl，100 mM NaCl，20 mM β-ME，1 mM EDTA，50% 甘油，0.1% (w/v) Triton X-100， pH 7.9

产品包装规格及组成

质量控制

1. SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带，毛细管电泳检测纯度在95%以上；

2. 酶动力学实时荧光法显示无DNA酶及RNA酶污染。

应用举例

【RNA 体外转录合成】

1. 在RNase free的离心管中加入右侧表格中各组分配制反应体系；

2. 将上述反应液混合均匀，低速离心至管底，37 ℃孵育4个小时。若转录本长度小于100 nt，增加反应时间至4-8个小时；

3. 转录后取样品进行凝胶电泳，取样1 μL稀释到5 μL，然后用1%的琼脂糖凝胶进行检测，以确定转录是否成功；

4. 反应完成后，加入DNase Ⅰ（RNase free），37 ℃孵育30 min以去除模板DNA

组分	体积
DNase/RNase-Free Water	Up to 20 uL
ATP/CTP/GTP/UTP (100 mM each)	2 uL each
10×Transcription Buffer	2 uL
DNA template	0.5 ~ 2 ug
RNase Inhibitor (40 U/u L)	0.5 uL
Inorganic Pyrophosphatase (0.1 U/uL)	0.5 uL
T7 RNA Polymerase (1 KU/uL)	0.2 ~ 1 uL
Mg 2+ (400 mM)	1 uL
Total Volume	20 uL

运输与保存

运输条件：蓝冰/干冰运输

保存温度：-20 ℃以下保存

避免反复冻融或频繁暴露于温度变化中，shou次使用时建议进行分装。

产品效期：12个月

注意事项

1. 使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20 ℃保存；

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；

3. 产品仅供研究使用。