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牛痘病毒加帽酶 (10 KU/mL)说明书

更新时间:2023-10-24      点击次数:144

牛痘病毒加帽酶 (10 KU/mL)说明书

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产品描述

真核生物中mRNA经转录后修饰在5'端形成一个特殊结构,即帽子结构,该结构对mRNA的稳定、转运与翻译过程均有较重要作用。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子结构的有效酶,其由D1和D12两个亚基组成,兼具RNA三磷酸酯酶活性、鸟苷酰基转移酶活性和鸟嘌呤甲基转移酶活性,可将7-甲基鸟嘌呤帽结构(m7Gppp)连接到RNA的5'末端(m7Gppp5'N)。牛痘病毒加帽酶,在合适浓度的加帽缓冲液(Capping buffer),鸟苷三磷酸(GTP),S-腺苷甲硫氨酸(SAM)等存在条件下,能够在一个小时之内对RNA进行加帽,并且保证正确的方向。

本品以无菌液体形式提供,可应用于体内/体外翻译前mRNA的加帽反应或mRNA的5'末端标记反应。

产品组分

组分名称

产品编码/规格

78MRNA-1105A(500 U)

78MRNA-1105B(2000 U)

78MRNA-1105C(10000 U)

10×Capping Buffer

150 ul

500 ul

1.25 mL×2

SAM(32mM)

50 ul

200 ul

1 ml

RNase free water

1ml

1ml

1mlx3

Vaccinia Virus Capping Enzyme (10 U/μL)

50 ul

200 ul

1 mL












产品性质

来源(Source)

携带牛痘病毒加帽酶基因的E. coli

最适温度(Optimum Temperature)

37℃

储存缓冲液(Storage Buffer)

20 mM Tris-HCl pH 8.0,100 mM NaCl,1 mM DTT,0.1 mM EDTA,0.1% Triton X-100,50%甘油

活性单位定义(Unit Definition)

37℃条件下,1小时内将10 pmol GTP(α- 32P)掺入到一条含80个核苷酸(80 nt)转录产物上所需要的酶量,即为1个单位。

产品应用【 加帽反应 】适用于10 μg RNA(≥100 nt)的加帽反应,反应体系20 μL,且可根据实验需要放大。1. 取10 μg RNA,用RNase free water将适量RNA稀释至15 μL;2. 将RNA置于65℃加热5 min,结束后冰上放置5 min;3. 按照右侧表格依次加入各组分;4. 37℃反应30 min;5. RNA加帽完成,可进行后续实验。

组分体积
Denatured RNA15 ul
10×Capping Reaction Buffer2 ul
GTP (10 mM)1 ul
SAM (2 mM)1 ul
Vaccinia Capping Enzyme (10 U/μL)1 ul
Total volume20ul

【 5′ 末端标记反应 】本步骤适用于 5′末端带有三磷酸的RNA标记,且可根据实验需要放大。其标记效率受反应体系中RNA与GTP摩尔浓度比以及RNA样本中GTP含量影响。1. 用RNase Free Water将适量RNA稀释至14 μL;2. 将RNA置于65℃加热5 min,结束后冰上放置5 min;3. 按照右侧表格依次加入各组分;4. 37℃孵育30 min;5. RNA 5′末端标记完成,可进行后续实验。

组分体积
Denatured RNA14 ul
10×Capping Reaction Buffer2 ul
GTP Mix2 ul
SAM (2 mM)1 ul
Vaccinia Capping Enzyme (10 U/μL)1 ul
Total volume20 ul

*注:GTP Mix为GTP和少量标记物,GTP储液应稀释为反应体系中mRNA摩尔浓度的1~3倍。 注意事项:(1)用于加帽反应的RNA在使用前应进行纯化并溶解于RNase free water 。溶液中不能含有EDTA和盐。(2)加帽酶反应前加热RNA可以去除转录产物5′的二级结构。如果转录产物的5′端结构复杂,可将加热时间延长至10 min。(3)如果转录产物的5′端结构复杂,为提高加帽效率可将反应时间延长至120 min。(4)SAM在室温下会逐渐降解,SAM降解会导致N 7 甲基化效率降低,会进一步导致加帽失败,因此需始终放置在冰上。此外,也可以通过体系优化适当提高用量以保证加帽反应顺利进行。 其他用途可参考上述用途或相关文献资料进行实验

运输和保存方法

干冰运输。-20 ºC保存,避免反复冻融,有效期1年。

注意事项

1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;

2. 所提取的RNA需经过纯化并使用无核酸酶的水重悬;

3. 在加入酶之前需要对RNA溶液进行加热以去除5'末端的二级结构;

4. 对于已知5'末端结构的RNA,可以延长反应时间至60分钟,提高加帽效率;

5. 5'末端标记反应体系中,GTP储液应稀释为反应体系中mRNA摩尔浓度的1-3倍。


货号品名规格品牌
78MRNA-1105A牛痘病毒加帽酶 (10 KU/mL)500 U

BIOHUB

78MRNA-1105B牛痘病毒加帽酶 (10 KU/mL)2000 U

BIOHUB

78MRNA-1105C牛痘病毒加帽酶 (10 KU/mL)10000 U

BIOHUB







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