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mRNA Cap 2′-O-甲基转移酶(50U/μL)说明书

更新时间:2023-10-24      点击次数:134

mRNA Cap 2′-O-甲基转移酶(50U/μL)说明书

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产品描述

mRNA Cap2氧甲基转移酶(mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase)是一种来自于牛痘病毒的重组蛋白。该酶可以在RNA的5´末端紧挨帽结构的第一个核苷酸的2´-O位置处添加一个甲基基团。该酶利用SAM作为甲基供体来甲基化加帽RNA,从而形成Cap1结构。Cap1结构能增强mRNA的翻译效率,因此可有助于改善mRNA转染和显微注射实验中的表达。该酶需要有m7GpppN即7-甲基鸟苷帽结构的RNA作为底物。

产品性质来源:携带牛痘病毒2'-O-甲基转移酶基因的E. coli分子量:82 kDa纯度:≥95%比活:50 U/μL比活单位定义:在 37℃下1 h内将10 pmol 80 nt 的带帽RNA转录物甲基化所需要的酶量定义为1个活性单位存储缓冲液:20 mM Tris-HCl,100 mM NaCl,1 mM DTT,0.1 mM EDTA,0.1% TritonX-100,50%甘油,pH 8.0 产品组分

组分

产品编号/规格

78MRNA-1106A

78MRNA-1106B

78MRNA-1106C

mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase (50 U/μl)

50 μl

200 μl

1 ml

10x Capping Reaction Buffer

150 μl

500 μl

1.25x2 ml

SAM (32 mM)

50 μl

200 μl

1 ml

RNase free water

1 ml

1 ml

1mlx3

产品应用【Uncapped RNA 一步加帽法 】适用于10 μg以内 uncapped RNA(≥100 nt)的加帽反应,反应体系20 μL,且可根据实验需要放大。1. 取10 μg RNA,用RNase free water将适量RNA稀释至14 μL;2. 将RNA置于65℃加热5 min,结束后冰上放置5 min;3. 按照右侧表格依次加入各组分;4. 37℃反应60 min;5. RNA加帽完成,可进行后续实验。

组分体积
Denatured uncapped RNA14 ul
10x Capping Buffer2 ul
GTP (10 mM)1 ul
SAM (4 mM)1 ul
Vaccinia Capping Enzyme (10 U/μL)1 ul
mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase (50 U/μL)1 ul
Total volume20 ul

【 Cap 0-RNA 的甲基化反应 】适用于10 μg以内 Cap 0-RNA(≥100 nt)的甲基化反应,反应体系20 μL,且可根据实验需要放大。1. 用RNase Free Water将适量RNA稀释至15 μL;2. 将RNA置于65℃加热5 min,结束后冰上放置5 min;3. 按照右侧表格依次加入各组分;4. 37℃孵育60 min;5. RNA加帽完成,可进行后续实验。

组分体积
Denatured capped RNA15 ul
10x Capping Buffer2 ul
GTP (10 mM)1 ul
SAM (4 mM)1 ul
mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase (50 U/μL)1 ul
Total volume20 uL

注意事项: (1)用于加帽反应的RNA在使用前应进行纯化并溶解于RNase free water 。溶液中不能含有EDTA和盐。(2)加帽酶反应前加热RNA可以去除转录产物5′的二级结构。如果转录产物的5′端结构复杂,可将加热时间延长至10 min。(3)如果转录产物的5′端结构复杂,为提高加帽效率可将反应时间延长至120 min。(4)SAM在室温下会逐渐降解,SAM降解会导致N 7 甲基化效率降低,会进一步导致加帽失败,因此需始终放置在冰上。此外,也可以通过体系优化适当提高用量以保证加帽反应顺利进行。 其他用途可参考上述用途或相关文献资料进行实验 运输和保存方法

运输条件:蓝冰/干冰运输

保存温度:-20℃以下保存

避免反复冻融或频繁暴露于温度变化中,shou次使用时建议进行分装。

产品效期:12个月

注意事项

1. 使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存;

2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;

3. 产品仅供研究使用



货号品名规格品牌
78MRNA-1106AmRNA Cap 2′-O-甲基转移酶(50U/μL)2500 U

BIOHUB

78MRNA-1106BmRNA Cap 2′-O-甲基转移酶(50U/μL)10000 U

BIOHUB

78MRNA-1106CmRNA Cap 2′-O-甲基转移酶(50U/μL)50000 U

BIOHUB







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