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线性聚乙烯亚胺PEI MW40000说明书

更新时间:2023-10-24      点击次数:116

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产品描述

BIOHUB 线性聚乙烯亚胺PEI MW40000 转染试剂系列是基于聚乙烯亚胺(Polyethylenimine,PEI)的产品,因其较高的转染效果,已广泛应用于AAV,LV和重组蛋白等工业化生产。

聚乙烯亚胺是一种具有较高阳离子电荷密度的有机大分子,每相隔两个碳原子,即每第三个原子都是质子化的氨基氮原子,使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的“质子海绵"体(proton sponge),因此,非常容易结合带负电荷的核酸分子,形成带正电荷的复合物颗粒,该颗粒与细胞表面阴离子结合,很容易通过内吞作用进入细胞;并且可抵御溶酶体的降解作用,从而提高核酸分子的表达水平。


基本信息   CAS49553-93-7

分子式  (C2H5N)n . xHCl

分子量  40,000 (~22,000 free base)

熔点  73-75℃

溶解性  溶于冷水

不溶于  常用有机溶剂(乙醇、丙酮、四氢呋喃)

形式  白色固体粉末

生物毒性  未知

安全防护  手套,护目镜,口罩

存储  粉末至少可以保存一年, PEI内含自由氨基,建议开封后4℃干燥保存,减缓氧化过程。

运输  常温运输

特点  大量实验数据反馈细胞通用性好,有非常好的转染效果,尤其对293,CHO细胞系有特别显著的转染效果。


配置方法

转染操作流程:(贴壁细胞转染方法)

1. 接种细胞: 转染前一天,用胶原酶(BIOHUB Cat#78CL10002)消化细胞并计数(不建议用胰酶)。将细胞铺入细胞培养的器皿,每个孔加入的细胞量参考下图表1,一般18-24小时(sf9细胞为3-4小时)后转染。转染时细胞汇合度应至少达到 70~80%以上。转染前更换为含5%血清的生长培养基。

2. 准备 DNA-PEI 复合物: DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。用 Opti-MEM ITM或其他适合的无血清培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如 NEST 5 mL /14 mL 离心管。 稀释PEI和DNA的体积为培养体积的1/10-1/20, DNA浓度为1ug/ml

3. 转染细胞: 直接向每个孔中加入 DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。转染4-6小时(sf9细胞为2小时 )后,更换为生长培养基。

4. 孵育细胞和分析结果: 在 CO2培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后最快 7 h 即可检测到转入基因的表达。 请自行确定适合的检测时间。

5. 转染 24 h 后,将细胞传代至新鲜的生长培养基中(将细胞稀释 10 倍 以上),在 CO2培养箱中 37℃孵育过夜。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约 1~2 周可 筛选到耐药性克隆,在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。

转染操作流程:(悬浮细胞转染方法)

1. 转染前准备:悬浮细胞传代接种于适量含悬浮细胞生长培养基中,合适条件下培养。根据培养瓶大小调整细胞密度(例100mL培养瓶,1X10 6 cells/mL),然后旋紧瓶口放入摇床继续培养,2~4小时后可以进行转染。

2. 准备 DNA-PEI 复合物:DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室。用 Opti-MEM ITM或其他适合的无血清培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如 NEST 5 mL /14 mL 离心管。

3. 转染细胞:将PEI-DNA转染复合物逐滴加入到细胞培养液中,摇匀后旋紧瓶口放回摇床合适培养条件下培养至可以分析检测。

4. 孵育细胞和分析结果:转染后一般24-72h即可检测到转入基因的表达。 请自行确定适合的检测时间。

5. 如果要获得更多的蛋白产量,有文献表明转染后24小时,可以适当稀释细胞,稀释比例参考范围(1:2—1:5)之间,可以增加蛋白产量,稀释效应与最佳稀释比率应根据经验确定。





       



产品背景

       BIOHUB 生产的78Bio PEI是一种优化的线性阳离子聚合物转染试剂,分子量分别为 25000 和 40000,78BioPEI40000 相比 25000 转染效率高,但毒性也略大于 78PIE25000。在 HEK293 和 CHO 的蛋白表达系统中,相比于市面上的脂质体 78BioPEI 都表现出高的蛋白表达量(无 论是 96 孔板还是 100L 的细胞反应器),以及更小的细胞毒性、更高的转染效和更高的可 重复性,并且十分经济的高性价比转染试剂。产品具有以下特点:

1.转染效率高,细胞毒性低;  蛋白表达量高;

2.节约成本:BIOHUB 78 PEI转染试剂 ,进口品质,亲民价格,至少能够降 40% 的转染试剂总成本;

3.适用于 HEK293 等真核细胞的转染;

4.适用于贴壁细胞和悬浮细胞的转染;

5.适用于有血清和无血清的转染条件;

6. 无机试剂,无动物源成分;

7. 产品稳定,质控严格;

8. 工艺流程适用范围广,容易优化 适合小规模培养板,培养瓶到大规模的生物反应器。

产品反馈

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注意事项

 1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 2. 本产品主要用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

 3.加热或加酸都有助于 78BioPEI 溶解。当然酸可能不用加那么多,详细用量可试加一点 ,搅拌看看,足够溶解就行,不一定需要加到 pH 那么低。

 4.一定要溶解充分,溶解不充分会影响后续的转染效率.

 5.冷冻后可能会影响其后续转染效果。


特别提醒:初次使用 78PEI 进行不同基因转染时应先做预试,优化出适合自己实验的, 最佳 PEI 和 DNA 的比例,通常筛选范围在 1:1 到 5:1 之间,如果之前用过Polysciences品牌的 PEI,用 78BioPEI 时应适当降低使用浓度。



货号品名规格品牌
78PEI40000-100mg线性聚乙烯亚胺PEI MW40000100mgBIOHUB
78PEI40000-1g线性聚乙烯亚胺PEI MW400001gBIOHUB
78PEI40000-5g线性聚乙烯亚胺PEI MW400005gBIOHUB









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