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热敏UDG酶说明书

更新时间:2023-10-24      点击次数:151

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产品详情
UDG酶可催化水解DNA中的尿嘧啶碱基与核糖之间的N-糖苷键,释放游离尿嘧啶碱基。本产品来源于大肠杆菌重组表达的嗜冷细菌的ung基因,分子量为 25KDa。本酶催化含尿嘧啶的单链和双链 DNA 释放游离尿嘧啶,对 RNA 无活性。本酶主要应用于防止PCR 扩增产物的交叉污染。它的作用原理基于:在 PCR 反应中以 dUTP 替代 dTTP 掺入 DNA 中,形成含 dU 碱基的 PCR 扩增产物,UDG 能选择性断裂单链和双链 DNA dU 碱基的糖苷键,降解 PCR 扩增产物,消除上轮扩增产物对新样本的污染问题。
特点

Ø  25-37度范围内活性高,避免了ji端热敏UDG常温失活的缺陷;

Ø  本酶在60℃下热处理10分钟,完quan不可逆失活;

Ø  本酶的反应体系与Taq DNA聚合酶buffer相同,保证了活性体系的一致性。

浓度
1U/μl
活性定义
37反应条件下,每分钟催化 60 pmole尿嘧啶碱基从含尿嘧啶的双链 DNA 上释放所需要的酶量 1 U
活性测定条件
10 mM Tris-HCl (pH 8.3, 25°C), 20 mM KCl, 10 mM (NH4)2SO4, 0.01% Tween 20, 1.5 mM MgCl2 中,37℃ 温育。
酶贮存缓冲液
20mM Tris-HCl (pH 7.5), 100mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM DTT, 0.05% Tween 20, 50% glycerol
产品包装规格及组成

Component

78DC10123-200U

78DC10123-1000U

热敏UDG

200U

1000U

10×UDG Buffer

0.4 ml×1

1.0 ml×1

运输与保存
-20℃保存  蓝冰运输
适用范围
主要应用于防止PCR 扩增产物的交叉污染。作用原理基于:在 PCR 反应中以 dUTP 替代 dTTP 掺入 DNA 中,形成了含 dU 碱基的 PCR 扩增产物,UDG能选择性断裂单链和双链 DNA U 碱基的糖苷键,降解 PCR 扩增产物,消除上轮扩增产物对新样本的污染问题。
应用举例

防止PCR产物污染的使用方法

1. 按如下表格配制PCR反应液

PCR组份

体积/μl

终浓度

10×Taq Buffer

5

dNTPs2.0 mM

5

0.2 mM

dUTP2.0 mM

1-5

0.04-0.2 mM

引物F10 μM

1.5

0.3 μM

引物R10 μM

1.5

0.3 μM

Template

1-5

/

热启动Taq聚合酶(2.5U/μl

1.0

2.5U

热敏UDG1U/μl

1.0

1U

ddH2O

Varable

/

总体积

50

/







2. 37℃下反应10分钟。

3. 在95下热失活UDG 2分钟(此步骤可省略,直接进行PCR,预变性步骤会失活UDG)。

4. PCR反应。

质量控制

无内切酶活性:50 U的本酶和1 μg的pBR322 DNA在37℃下反应2小时,DNA的电泳谱带不发生变化。


品名
货号规格品牌
热敏UDG酶78DC10123-200U200UBIOHUB
热敏UDG酶78DC10123-1000U1000UBIOHUB







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