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脂质过氧化探针C11-BODIPY 581/591

简要描述:脂质过氧化探针C11-BODIPY 581/591是一种新型的对 Lipid ROS 高选择性、高灵敏的脂质过氧化探针,与其他 ROS 捕获探针不同之处在于,具有好的亲脂性可以快速入膜,随后可以选择性的对细胞内和细胞膜中的脂质过氧化(Lipid ROS)进行捕获,并在氧化后仍保持亲脂性,不会离开脂质膜,该过程同时伴随荧光信号变化。

  • 产品型号:78EA10007
  • 厂商性质:经销商
  • 更新时间:2023-11-30
  • 访  问  量:2302

详细介绍

品牌BIOHUB供货周期两周
应用领域生物产业
产品描述
一、 化学结构:
二、 检测原理:

脂质过氧化探针C11-BODIPY 581/591是一种新型的对 Lipid ROS 高选择性、高灵敏的脂质过氧化探针,与其他 ROS 捕获探针不同之处在于,具有好的亲脂性可以快速入膜,随后可以选择性的对细胞内和细胞膜中的脂质过氧化(Lipid ROS)进行捕获,并在氧化后仍保持亲脂性,不会离开脂质膜,该过程同时伴随荧光信号变化。多用于荧光显微镜、流式细胞分析等对 Lipid ROS 的可视化监测。本产品 结构中多不饱和丁间二烯基在 Lipid ROS 催化氧化后,其荧光发射峰从 590 nm偏移至 510 nm。


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实验步骤

1. 样品溶解:

商品开封后,离心机轻甩;随后加入适量 DMSO 进行溶解,溶解度至少可达 25mg/mL。溶解后建议分装-20℃避光保存,尽量避免反复冻融,防止吸潮。

【注】:样品轻甩目的是为了避免痕量的探针吸附管壁损失样本。

2. 样品使用:

1流式细胞分析:

悬浮细胞:800 g 离心 5 min 收集细胞沉淀;随后 PBS 洗涤细胞两遍。

贴壁细胞:弃培养液,用常温 PBS 或培养液轻洗细胞 2 次,随后yi酶消化,800g 离心 5 min 收集细胞沉淀,随后 PBS 洗涤细胞两遍,每个样本收集 1~5 ×105 个细胞。(注意:操作过程中轻柔吹打细胞, 消化时间不宜过长,剧烈吹打或yi酶消化过度会影响实验结果)

本产品 用于脂质过氧化检测的推荐浓度为终浓度 5μM;配制方法:用新鲜空白培养液配制终浓度为 5μM 本产品染色液待用,DMSO 含量5‰。

(注意:该步操作建议在消化细胞前准备好,以免细胞消化后久置影响实验结果)

将事先配置好的脂质过氧化染色液加入收集的细胞沉淀中,推荐体积为 500μL,随后置于 37℃孵箱, 染色 30min,期间 5-10min 间隔轻弹细胞使其悬浮保证染色更充分。

染色结束后,800 g 离心 5 min,弃上清,随后用PBS 清洗细胞 2 次,加入 200μLPBS 重悬细胞用于流式分析。

2) 原位成像:

接种适当密度的细胞于 20mm 规格的盖玻片上也可用共聚焦小皿替代,给予实验药物处理适当时间后,吸去培养液,用 PBS 洗涤细胞一遍加入 500 μL 配制好的脂质过氧化染色液,于 37℃染色 30min(配制方法参考流式分析中的染色液配制)弃培养液,PBS 洗涤细胞两遍后荧光显微镜或激光共聚焦下进行成像检测。细胞在染色后应在 1 h 之内完成检测。

3)检测条件:
该分子探针在还原状态下最佳激发波长为 581 nm, 发射为 591nm;被 Lipid ROS 氧化后最佳激发波长为 500 nm,发射在 510nm。因此,在流式分析中检测通道为 FL1-A;激光共聚焦检测:氧化态激发波长可488nmFITC)通道;还原态激发波长可选 561 nmTRITC)通道。
实验案例分析
流式分析实验范例:
使用本试剂检测 10 μM RSL3(铁死亡经典诱导剂)处理 A549 细胞 24 h 后的细胞脂质过氧化水平的流式检测

原位成像实验范例:

下图为 RSL310 μM)处理A549 细胞 24 h 后,使用本试剂(5μM)对活细胞中脂质过氧化水平进行原位染色后激光共聚焦成像结果。

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注意事项
1. 此试剂盒仅供科研使用。
2. 使用前小心离心数秒取用,需佩戴手套操作,注意避免与皮肤、眼睛和黏膜接触。
3. 本试剂盒可用检测活细胞中 Lipid ROS 水平,用于评价细胞铁死亡状态。
 

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