无血清细胞冻存液是一种重要的生物样品保存方法,其关键保护剂在细胞低温冷冻保存过程中起着至关重要的作用。这些保护剂的作用机制主要包括以下几个方面:
一、渗透性保护剂
1.二甲基亚砜(DMSO)
作用机制:能够降低细胞内冰晶形成的温度,减少细胞在冷冻过程中因冰晶形成而导致的机械损伤。DMSO可以穿透细胞膜,与水分子结合,替代部分水分子参与冰晶形成过程,使冰晶的形成更加均匀、细小,从而减轻对细胞结构的破坏。
2.甘油
作用机制:作为另一种常用的低温保护剂,甘油的作用机制与DMSO类似。它也能防止细胞在冷冻过程中脱水,并通过与水分子结合来减少冰晶的形成,从而保护细胞免受冰晶损伤。
二、高分子保护剂
作用机制:如聚丙烯酸钠和羧甲基纤维素钠等高分子保护剂,通过增加溶液的黏度和形成保护性凝胶来保护细胞。这些高分子物质能够在细胞周围形成一层保护层,减少冰晶对细胞的直接冲击,同时稳定细胞膜,防止细胞破裂。
三、抗氧化剂
作用机制:在冷冻和解冻过程中,细胞可能会受到氧化应激的损伤。抗氧化剂如维生素E等能够减少这种氧化应激对细胞的损伤,保护细胞的正常生理功能。
四、糖类
作用机制:如蔗糖或海藻糖等糖类物质可以稳定细胞膜和蛋白质结构,并提供能量。在冷冻过程中,糖类能够减少冰晶的形成,同时保持细胞膜的完整性和稳定性。
五、缓冲体系
作用机制:如磷酸盐缓冲液(PBS)等缓冲体系能够维持无血清细胞冻存液的pH值稳定。在细胞冷冻和解冻过程中,pH值的波动可能会对细胞产生不利影响。缓冲体系能够中和细胞代谢过程中产生的酸性或碱性物质,保持冻存液的pH值在一个相对稳定的范围内,从而为细胞提供一个适宜的酸碱环境。
无血清细胞冻存液中的关键保护剂通过不同的作用机制共同保护细胞在冷冻过程中的结构和功能完整性。这些保护剂的协同作用使得无血清细胞冻存液在细胞生物学研究和生产应用中具有广泛的应用前景。