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血清使用常见问题及应对办法

更新时间:2023-08-24      点击次数:160


血清使用常见问题和应对方法

1、血清保存的最好方法?

   血清最好保存在-20℃保存。若一次使用不完一瓶,建议无菌分装于适当的灭菌容器内冷冻备用。

 

2、如何解冻血清,才能保证其质量不会受损?

   我们建议将血清从冷冻箱取出后,置于2℃~8℃冰箱中解冻,然后在室温下全融,解冻过程中必须规则地摇晃均匀,过大的温差变化(-20℃~-37℃,温差为57℃),极其容易造成血清析出沉淀。

注意:从低温冰箱取出血清直接置于56℃水浴中更是极其残忍的做法,是对血清的不负责任,对科学规则的无情践踏!

 

3、为什么血清在解冻后会出现絮状沉淀?应该怎样处理?

   血清中絮状沉淀产生的原因有很多,其中zui普遍的还是由于血清中脂蛋白的变性所致,而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后,也会存在于血清中,这也是造成沉淀的主要原因,但这些絮状沉淀并不影响血清本身的质量。欲去除沉淀,可采取自然沉降法或者将血清分装于无菌离心管中,以400-600G离心5min,上清液即可加入培养基内一起培养。我们不建议用过滤的方法去除絮状沉淀,因为沉淀会阻塞滤膜,造成过滤困难或无法过滤,另一方面,过滤血清这种行为可能会导致血清中部分营养成分的流失。

 

4、为什么要热灭活血清?有必要热灭活吗?

   加热可以灭活血清中的补体系统,使补体去活化。通常未灭活的补体能够刺激平滑肌收缩、肥大细胞和血小板组胺的释放、激活淋巴细胞和巨噬细胞,同时还能够参与溶解细胞的过程。

 

  诸多研究表明大多数细胞的培养无须进行血清的热灭活;实验研究显示,经正确热灭活处理的血清,对细胞的生长只有微小的促进或wan全没有促进作用,而通常因为高温处理影响了血清的质量,造成细胞生长速率降低。并且热处理过的血清,沉淀物明显增多,有会使研究者误以为是微生物的分裂增殖,因此,我们建议,若非必须,可以不进行热处理。而在免疫学研究和ES细胞、昆虫细胞、平滑肌细胞的培养过程中,推荐使用热灭活血清。

 

 

5、如何避免沉淀物的产生?

   建议您在血清使用的过程中,采用正确的解冻方法(冷冻→4℃→室温),若血清解冻时改变的温度太大(如冷冻→37℃)非常容易产生沉淀物。温度过高、时间过久、摇晃不均匀等,都会造成沉淀增多,我们建议如非必要无须对血清进行灭活;若必须热灭活,应严格遵守56℃,30min的原则,并随时摇晃均匀。


目前实验室常用品牌和型号

类型

代表产品

特点

特级类胎牛血清

(zui高级别的,专用于干细胞的胎牛血清)

Hyclone SH30070

北美血源 世界上唯yi经过40纳米过滤的顶级胎牛血清,内毒素含量小于10EU/ml,血红蛋白含量小于10mg/dl


Gibco  16000-044

北美血源100nm过滤3次,内毒素和血红蛋白含量都可以与Hyclone的SH30070.03相媲美


QFED10002-500ml

澳洲血源 ,质量控制严格,不需要进行不同批次测试,无病毒,无支原体,安全性,内毒素低于1

优级类胎牛血清

Hyclone  SH30396

加拿大血源,经过3次100nm过滤,内毒素含量小于25EU/ml,血红蛋白含量小于25mg/dl,应用细胞非常广泛


Gibco 10099-141

澳大利亚,一级别的血清,也能用于干细胞培养,批间差异小,质量更稳定,内毒素含量更低,无病毒,无支原体


QFED10001-500ml

南美顶级胎牛血清,适用于绝大多数种类的细胞培养已通过300多种细胞株和上百种原代细胞的验证,细胞生长速度快,状态良好。

普通进口胎牛血清

Hyclone SV30087

南美血源,国内(兰州)过滤并测试检验,经三次100纳米过滤,内毒素含量小于等于10EU/ml,血红蛋白含量小于等于20mg/d,广泛用于各种肿瘤细胞的培养


SeraPro S601P

南美标准胎牛血清,质量严格控制,无病毒,无支原体,具有较高的安全性

国产的各种系列胎牛血清


国产的胎牛血清不是严格意义的胎牛血清。不过也很多实验室使用

其他血清(新生牛血清,小牛血清)


大多是用于封闭液、保护液、缓冲液等等用途的


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