血清使用常见问题及应对办法

血清使用常见问题和应对方法

1、血清保存的最好方法？

   血清最好保存在-20℃保存。若一次使用不完一瓶，建议无菌分装于适当的灭菌容器内冷冻备用。

2、如何解冻血清，才能保证其质量不会受损？

   我们建议将血清从冷冻箱取出后，置于2℃～8℃冰箱中解冻，然后在室温下全融，解冻过程中必须规则地摇晃均匀，过大的温差变化（-20℃～-37℃，温差为57℃），极其容易造成血清析出沉淀。

注意：从低温冰箱取出血清直接置于56℃水浴中更是极其残忍的做法，是对血清的不负责任，对科学规则的无情践踏！

3、为什么血清在解冻后会出现絮状沉淀？应该怎样处理？

   血清中絮状沉淀产生的原因有很多，其中zui普遍的还是由于血清中脂蛋白的变性所致，而血纤维蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血清解冻后，也会存在于血清中，这也是造成沉淀的主要原因，但这些絮状沉淀并不影响血清本身的质量。欲去除沉淀，可采取自然沉降法或者将血清分装于无菌离心管中，以400-600G离心5min,上清液即可加入培养基内一起培养。我们不建议用过滤的方法去除絮状沉淀，因为沉淀会阻塞滤膜，造成过滤困难或无法过滤，另一方面，过滤血清这种行为可能会导致血清中部分营养成分的流失。

4、为什么要热灭活血清？有必要热灭活吗？

   加热可以灭活血清中的补体系统，使补体去活化。通常未灭活的补体能够刺激平滑肌收缩、肥大细胞和血小板组胺的释放、激活淋巴细胞和巨噬细胞，同时还能够参与溶解细胞的过程。

  诸多研究表明大多数细胞的培养无须进行血清的热灭活；实验研究显示，经正确热灭活处理的血清，对细胞的生长只有微小的促进或wan全没有促进作用，而通常因为高温处理影响了血清的质量，造成细胞生长速率降低。并且热处理过的血清，沉淀物明显增多，有会使研究者误以为是微生物的分裂增殖，因此，我们建议，若非必须，可以不进行热处理。而在免疫学研究和ES细胞、昆虫细胞、平滑肌细胞的培养过程中，推荐使用热灭活血清。

5、如何避免沉淀物的产生？

   建议您在血清使用的过程中，采用正确的解冻方法（冷冻→4℃→室温），若血清解冻时改变的温度太大（如冷冻→37℃）非常容易产生沉淀物。温度过高、时间过久、摇晃不均匀等，都会造成沉淀增多，我们建议如非必要无须对血清进行灭活；若必须热灭活，应严格遵守56℃，30min的原则，并随时摇晃均匀。

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