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核糖核酸酶 H说明书

更新时间:2023-10-24      点击次数:108

核糖核酸酶 H说明书

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产品详情

核糖核酸酶HRNase H)是一种核糖核酸内切酶,它能够特异性地水解杂交到DNA链上的RNA 的磷酸二酯键。该酶不能消化单链RNA、单链或双链DNA主要用于cDNA第二链合成时除去 mRNA ;以及一步法RT-PCR中去除mRNA链,生成cDNA单链,提高cDNA与引物的配对效果,改善RT-PCR效果。

本公司RNase H是重组表达,并经多步纯化制备大肠杆菌RNase H重组蛋白

特点

Ø 不消化单链RNA、单链或双链DNA

Ø 热失活:65℃×20 分钟

浓度

5U/μl

活性定义

1单位指在温度为37℃1× RNase H 反应缓冲体系的条件下,20min内能水解20 pmol荧光标记的50 bp RNA-DNA杂交链成1 nmol核苷酸所需的酶量

活性测定条件

50 mM Tris-HCl75 mM KCl3 mM MgCl210 mM DTT(pH 8.3 @ 25℃)37℃温育。

酶贮存缓冲液

10mM Tris-HCl50 mM KCl1 mM DTT 0.1 mM EDTA 200 µg/ml BSA50% Glycerol pH 7.4 @ 25°C

产品包装规格及组成

Component

78DC10109-250U

78DC10109-1250U

RNase H

250U

1250U

10× RNase H Buffer

0.5ml

1.5ml


适用范围

Ø 除去杂交到poly(dT)上的mRNA poly(A)

Ø cDNA第二链合成时除去 mRNA

应用举例

1RT-PCR去除RNA/DNA杂合双链的RNA

1按下表配制反应体系


反应组分

ul

10× PCR Buffer

5

Primer-F10uM

2

Primer-R10uM

2

dNTP2mM

5

RT反转录产物  

100-200ng

RNase H

1

Taq DNA聚合酶

2.5U

H2O

Variable

总体积

50

2) 35°C反应5-10min

3) PCR反应

4) 琼脂糖电泳检测DNA,或进行后续实验


2cDNA第二链合成时除去 mRNA

1按下表配制反应体系

反应组分

ul

10× Buffer

5

Primer-F10uM

2

dNTP2mM

5

RT反转录产物  

100-200ng

RNase H

1

Ec DNA聚合酶大片段

1

H2O

Variable

总体积

50

2) 35°C反应15-30min

3) 琼脂糖电泳检测DNA,或进行后续实验

运输与保存

-20℃保存

注意事项

l RNase H为常温酶,在16-42℃范围内具有高活性,最佳反应温度为32-37℃。

l 本酶不耐高温,因此反应温度不能高于42℃。

警告: 本产品仅限科研实验使用,临床应用安全性和有效性未鉴定,不可用于医疗临床诊断。

质量控制

相关测试表明无外源内切、外切脱氧核糖核酸酶、RNase污染。PCR方法检测无宿主残余DNA



货号品名规格品牌
78DC10109-250U核糖核酸酶 H250U

BIOHUB

78DC10109-1250U核糖核酸酶 H1250U

BIOHUB







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