核糖核酸酶 H说明书

核糖核酸酶 H说明书

产品详情

核糖核酸酶H（RNase H）是一种核糖核酸内切酶，它能够特异性地水解杂交到DNA链上的RNA 的磷酸二酯键。该酶不能消化单链RNA、单链或双链DNA。主要用于cDNA第二链合成时除去 mRNA ；以及一步法RT-PCR中去除mRNA链，生成cDNA单链，提高cDNA与引物的配对效果，改善RT-PCR效果。

本公司RNase H是重组表达，并经多步纯化制备的大肠杆菌RNase H重组蛋白。

特点

Ø 不消化单链RNA、单链或双链DNA

Ø 热失活：65℃×20 分钟

浓度

5U/μl

活性定义

1单位指在温度为37℃，1× RNase H 反应缓冲体系的条件下，20min内能水解20 pmol荧光标记的50 bp RNA-DNA杂交链成1 nmol核苷酸所需的酶量。

活性测定条件

50 mM Tris-HCl，75 mM KCl，3 mM MgCl₂，10 mM DTT(pH 8.3 @ 25℃)，37℃温育。

酶贮存缓冲液

10mM Tris-HCl，50 mM KCl，1 mM DTT ，0.1 mM EDTA ，200 µg/ml BSA，50% Glycerol ，pH 7.4 @ 25°C。

产品包装规格及组成

适用范围

Ø 除去杂交到poly(dT)上的mRNA poly(A)

Ø 在cDNA第二链合成时除去 mRNA

应用举例

1、RT-PCR去除RNA/DNA杂合双链的RNA链

1）按下表配制反应体系

2) 35°C反应5-10min；

3) PCR反应。

4) 琼脂糖电泳检测DNA，或进行后续实验

2、cDNA第二链合成时除去 mRNA

1）按下表配制反应体系

2) 35°C反应15-30min；

3) 琼脂糖电泳检测DNA，或进行后续实验

运输与保存

-20℃保存

注意事项

l 本RNase H为常温酶，在16-42℃范围内具有高活性，最佳反应温度为32-37℃。

l 本酶不耐高温，因此反应温度不能高于42℃。

警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。

质量控制

相关测试表明无外源内切、外切脱氧核糖核酸酶、RNase污染。PCR方法检测无宿主残余DNA。