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无机焦磷酸酶 (0.1 U/μL)说明书

更新时间:2023-10-24      点击次数:87

无机焦磷酸酶 (0.1 U/μL)说明书

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产品描述

本制品为利用大肠杆菌大规模发酵表达的 重组无机焦磷酸酶(酵母来源),可催化无机焦磷酸盐水解生成正磷酸盐:P2O7 4- +H2O+PPase→2HPO4 2- 。这是一个高放能的反应,自然条件下,无机焦磷酸酶可以为蛋白、RNA和DNA的生物合成反应提供热力学动力,并在脂代谢,钙吸收以及骨形成等生物转化过程中发挥作用。该酶在实验应用中能够高效发挥作用,保证反应的进行。在分子生物学中可用于反转录反应中提高RNA产量。

来源:重组E.Coli

分子量:63 kDa

纯度:≥95%

比活:0.1 U/μL

比活单位定义:标准反应条件下每分钟催化无机焦磷酸盐生成 1 μmol 磷酸盐所需的酶量定义为 1 个活性单位

存储缓冲液:20 mM Tris-HCl,100 mM NaCl,1 mM DTT,0.1 mM EDTA,50% 甘油, pH 8.0

质量保证

1. SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带;

2. 酶动力学实时荧光法显示无RNA酶污染。

产品性质1. 无机焦磷酸酶是一种金属蛋白酶,达到最大活性需要 Mg 2+ 的参与;2. 热稳定性:最佳反应温度为 25 ℃,65 ℃ 10min 可使该酶失活;3. 反转录反应中提高RNA产量;4. 增强DNA复制能力。产品组分

组分体积
DNase/RNase-Free Water Up to20 µL
ATP/CTP/GTP/UTP (100 mM each)2 µL each
10×Transcription Buffer2 µL
DNA template0.5 ~ 2 ug
RNase Inhibitor (40 U/µL)0.5 µL
Pyrophosphatase,Inorganic (0.1 U/µL)0.5 µL
T7 RNA Polymerase (1 KU/µL)0.2 ~ 1 µL
Mg 2+ (400 mM)1 µL
Total Volume20 µL

产品应用1. 优化 RNA 转录:提高体外转录反应的 RNA 产量;2. 优化 PCR 反应:提高效率,增加 DNA 产量;3. 去除利用焦磷酸盐测定法来进行 SNP 基因分型的试剂中的 PPi 污染物;4. 促进蛋白质、RNA 和 DNA 的合成;5. 催化 PPi + H2O→2Pi 的反应;6. 作为反应缓冲液的组分用于氨酰化的测定,以对掺入tRNA的[3H]L-甲硫氨酸进行定量。运输和保存方法

干冰运输。-20℃保存,有效期一年。推荐分装保存,避免反复冻融。

应用实例1. 在RNase free的离心管中加入右侧表格中各组分配制反应体系;2. 将上述反应液混合均匀,低速离心至管底,37 ℃孵育4个小时。若转录本长度小于100 nt,增加反应时间至4-8个小时;3. 转录后取样品进行凝胶电泳,取样1 μL稀释到5 μL,然后用1%的琼脂糖凝胶进行检测,以确定转录是否成功;4. 反应完成后,加入DNase Ⅰ(RNase free),37 ℃孵育30 min以去除模板DNA。 注:(1)为了特定区域的有效转录,建议在其区域下游把模板DNA预先切成平端或5′突出末端。(2)反应体系于室温配置。由于10×Transcription Buffer 中含有亚精胺,低温下亚精胺浓度过高容易引起DNA模板沉淀,建议最后加入模板DNA。(3)建议在PCR仪中进行反应,为防止蒸发,建议开启热盖功能。(4)使用试剂、容器等无RNA酶污染。注意事项1使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20 ℃保存;2该酶在多种反应 Buffer 中均具有活性,通常该酶在 HDA、LAMP 等实验中,直接加入即可;3该酶的用量在不同的实验中需要优化,通常在 0.05~1 U/ml 浓度调整;4该酶的最佳反应温度为 25 ℃,其在 16~37℃均有活性,65 ℃ 10min 可使该酶失活;5辅因子:Mg2+对于酶发挥活性是必须的。6为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。7、本产品主要用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。


货号品名规格品牌
78MRNA-1109A无机焦磷酸酶 (0.1 U/μL)10U

BIOHUB

78MRNA-1109B无机焦磷酸酶 (0.1 U/μL)50U

BIOHUB

78MRNA-1109C无机焦磷酸酶 (0.1 U/μL)100U

BIOHUB





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