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T4 DNA聚合酶 (Exo-)说明书

更新时间:2023-10-24      点击次数:71

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产品详情

T4 DNA聚合酶是来源于T4噬菌体的DNA聚合酶,又名T4 gp43,分子量为104kDa,在T4噬菌体DNA复制中负责先导链和滞后链5’→3’方向的脱氧核糖核酸合成。T4 DNA polymerase的聚合酶活性强于DNA 聚合酶 I,不具有 5'-3' 核酸外切酶活性。本T4 DNA polymerase(exo-)为通过点突变D219A改造,使其3'-5' 外切核酸酶活性大大降低,但保留了完整的聚合酶活性。

本公司T4 DNA polymerase 是重组表达,并经多步纯化制备的重组蛋白。

特点

Ø 无链置换活性

Ø 5’-3’外切酶活性,不能进行切口平移

Ø 3’-5’外切酶活性大大地降低

Ø 热失活:75°C for 20 min

浓度

5U/μl

活性定义

一个活力单位即在37℃条件下,30分钟内催化10 nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。

活性测定条件

1×T4 DNA polymerase (exo-)Buffer20 mM Tris-HCl50 mM NaCl10 mM MgCl20.5mM DTT0.1mg/ml BSA (pH 7.9 @ 25°C)37℃温育

酶贮存缓冲液

     20 mM Tris-HCl200 mM NaCl10 mM MgCl25mM DTT50% GlycerolpH 7.5

产品包装规格及组成

Component

78DC10062-200U

78DC10062-1000U

T4 DNA polymerase(exo-)

200U

1000U

10×T4 DNA polymerase (exo-)Buffer

0.5ml

1.5ml

0.1% BSA1mg/ml

0.5ml

1.5ml







适用范围

Ø 缝隙填充(无缺口平移活性)

Ø 去除3’突出单链或补平5’突出单链,形成平末端

Ø 生成无缝克隆中的5突出端,实现基因和载体的互补配对

应用举例

1.补平5’突出单链,形成平末端

1按下表配制反应体系

反应组分

ul

10× Buffer

2

2mM dNTP

2

底物:3’突出或5’突出DNA

100ng-1µg

T4 DNA polymerase (5U/µl)

1

0.1%BSA

2

H2O


总体积

20













2) 37×30min反应

375×15min失活酶

按需进行后续实验。

质量控制

经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。

运输与保存

-20℃可保存2年,避免反复冻融。

注意事项

l 适用于凹陷单链区聚合补平反应(聚合酶反应)的缓冲液包括:AM Buffer A-DA1-D1T4 DNA连接酶反应缓冲液。

l 鉴于AM Buffer B2是此酶最youBuffer当使用包含BSA的缓冲时,建议补充BSA

l Activity in AM BuffersAM Buffer A: 60% AM Buffer BCD: 100%

l 离子强度超过100 mM时活性将被抑制,SH基的还原剂促进活性。

l 活性易受模板DNA高级结构影响,T4 gene 32(T4 SSB)蛋白可以显著提高聚合酶活性。



货号品名规格品牌
78DC10062-200UT4 DNA聚合酶 (Exo-)200UBIOHUB
78DC10062-1000UT4 DNA聚合酶 (Exo-)1000UBIOHUB






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