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PAP(KlenTaq-S 测序酶)说明书

更新时间:2023-10-24      点击次数:47

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产品详情

KlenTaq-S 测序酶是Taq DNA 聚合酶的改造版,为 Taq DNA 聚合酶的大片段,并做了基因突变。本酶具有 5’→3’聚合酶活性,无5’→3’外切酶活性和 3’→5’外切酶活性。相比普通Taq DNA 聚合酶,KlenTaq-S 测序酶具有很强的 ddNTP 的渗入能力,因此其适用于终止法 DNA 测序或焦磷酸解反应 SNP 分析。

本公司 KlenTaq-S 测序酶是重组表达,并经多步纯化制备的重组蛋白。

活性定义活性单位指在 72℃下, 1×AM PCR Buffer 130 min 内将 10 nmole dNTP 掺入酸不溶性物质所需的酶量。

特点

1.尤其适合 ddNTP 等修饰核苷酸的掺入反应

2.相比全长 Taq DNA 聚合酶,本酶比活性有所降低

适用范围

ddNTP 终止法DNA 测序(一代测序

焦磷酸解反应延伸法 SNP 分析

质量控制

经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。

酶贮存缓冲液

20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.5% Nonidet P40, 0.5%Tween20, and 50% glycerol.

应用举例

以下反应举例为 50 μl 标准 PCR 体系,仅供参考。实际 PCR 条件应根据模板、引物、目的片段大小加以优化,确定最佳反应条件。

1) 按下表配制反应体系

组份

体积/μl

终浓度

10×AM PCR Buffer 1

5

dNTPs2.0 mM

5

0.2 mM

引物 F10 μM

1.5

0.3 μM

引物R10 μM

1.5

0.3 μM

Template

Varable*

/

KlenTaq-S测序酶(5U/μl

0.5

2.5U

ddH2O

Varable

/

总体积

50

/














*模板DNA用量参数(50 μl反应体系):

人基因组DNA100-1000 ng ; 微生物基因组DNA 10-100ng;PCR产物 1 ng-10 ng Plasmid DNA 5-30 ng ; cDNA from RT reaction 1-5 μl 。

2) 按如下条件进行反应,

95

2-5 min


95

15 sec

25-35 Cycles

55~72

20 sec

72

1kb/min

72

5 min









3) 琼脂糖凝胶电泳检测PCR 产物,或按实验目的进行后续操作。


运输与保存

-20℃可保存 2 年,避免反复冻融

注意事项

1.PCR 条件和野生型 Taq DNA 聚合酶类似,对特定 DNA 的测序反应可能需要优化。2.本酶扩增能力较野生型 Taq DNA 聚合酶有所降低,PCR 产量有所降低,不建议用于常规 PCR3.不可用于 Taqman 探针法 q-PCR 浓度5U/uL


货号品名规格品牌
78BEA10012-250UPAP(KlenTaq-S 测序酶)250UBIOHUB
78BEA10012-1250UPAP(KlenTaq-S 测序酶)1250UBIOHUB
78BEA10012-5000UPAP(KlenTaq-S 测序酶)5000UBIOHUB
78BEA10012-12500UPAP(KlenTaq-S 测序酶)12500UBIOHUB







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